Különbség a nitrocellulóz és a PVDF között | Nitrocellulóz vs PVDF
Kulcskülönbség - Nitrocellulóz vs PVDF
A Western blotolás olyan módszer, amely lehetővé teszi fehérjékből származó fehérjék kimutatását és mennyiségi meghatározását. A technika megbízhatósága a megfelelő membrán kiválasztásától függ a fehérjék felszívódásától. Különböző típusú mikroporózus membránok vannak. A nitrocellulóz és a PVDF membránok két ilyen membrán a kutatók számára előnyös, mivel különleges tulajdonságaik vannak a többi típusú membránokon. A nitrocellulóz vagy a PVDF közötti választás szintén a western blotolás egyik kihívása. Mind a nitrocellulóz, mind a PVDF nagy fehérjeabszorpciós kapacitással rendelkezik. A nitrocellulóz és a PVDF membrán között a legfontosabb különbség az, hogy a nitrocellulóz membránok nem képesek az antitestek eltávolítására és a membrán újrafelhasználására antitestek visszaszorítására, míg a PVDF membránok sztrippelési és újrafelhasználási képessége .
Tartalomjegyzék
1. Áttekintés és kulcskülönbség
2. Mi a Nitrocellulóz
3. Mi a PVDF
4. Side by Side Összehasonlítás - Nitrocellulóz vs PVDF
5. Összefoglaló
Mi a Nitrocellulóz?
Nitrocellulóz egy polimer, amelyet cellululózt salétromsavval kezelnek, és mikroporózus membránok előállítására használják a molekuláris biológiában, különösen blotting technikák, mint a déli, északi és nyugati blot. A nitrocellulóz membránok pórusméretei 3 és 20 μm közöttiek. A nitro-cellulóz mikroporózus membránok megkönnyítik a membrán felszínén bekövetkező immunokémiai reakció kimutatását. Ezért a nitrocellulóz membránokat gyakran alkalmazzák fehérjék immobilizálására és specifikus fehérjék detektálására Western blotban. A nitrocellulóz membránok glikoproteineket és nukleinsavakat is immobilizálhatnak.
A nitrocellulóz membránok előnyösek az oldalirányú áramlási vizsgálatokban, mivel számos jellemző található. A nitrocellulóz membránok nagy koncentrációban abszorbeálják a fehérjéket. A membrán nedvesítésére használt oldószer nem csökkenti a nitrocellulóz membránfehérje felszívódását. A nitrocellulóz membránok könnyen elválaszthatók a kívánt gélméretre, és elektromos vagy kapilláris transzferrel átvihetik a fehérjéket a gélről a membránra. A nitrocellulóz lehetővé teszi a fehérjék nagyobb áramlását a membránon keresztül, nagy kötési potenciállal. A nitrocellulóz jobb kezelhetőséget mutat. A nitrocellulóz membrán egy másik különleges tulajdonsága, hogy könnyen tapadhat nem oldószerrel vízálló ragasztókra különböző műanyag hátlapokra.
01. ábra: Nitrocellulóz membrán nyugati blotoláshoz
Mi a PVDF?
A polivinilidén-difluorid (PVDF) a vinilidén-difluorid polimerizációjával előállított fluoropolimer, és a fehérjék nagy immobilizációs képességgel bír. Ezért a PVDF-ből készített mikroporózus membránokat Western blot-technikában alkalmazzuk a fehérjék keverékéből származó specifikus fehérjék elemzésére. PVDF membránokat alkalmazhatunk aminosav-analízishez és fehérje szekvenáláshoz is. A PVDF membrán legfontosabb jellemzője a nitrocellulóz membránon, hogy könnyen eltávolítható az antitestekből és újra felhasználható a következő antitest-próbákhoz.
PVDF membránok vastagabbak, mint a nitrocellulóz membránok; így ellenállóbb a károsodásokhoz az újrafelhasználás során. A PVDF membránok nagymértékben hidrofóbak. Ezért használat előtt fel kell őket áztatni metanolban vagy izopropanolban.
Mi a különbség a nitrocellulóz és a PVDF között?
- diff cikk Közel a táblázat előtt ->
Nitrocellulóz vs PVDF |
|
| Nitrocellulóz egy cellulózból álló polimer. | A PVDF a vinilidén-difluorid polimerizálásával előállított fluorpolimer. |
| A membrán pórusmérete | |
| Tipikus pórusméretek: 0. 1, 0. 2 vagy 0. 45 μ | Tipikus pórusméretek: 0. 1, 0. 2 vagy 0. 45 μm |
| Fehérje kötési kapacitás A nitrocellulóz fehérjekötő kapacitása 80-100 μg / cm | |
| 2 . A PVDF fehérjekötő kapacitása 170-200 | ig / cm | 2 . Érzékenység |
| Ez alacsony érzékenységet mutat a PVDF-hez képest. | |
| Ez nagy érzékenységgel bír. | Alacsony expresszált fehérjék kimutatása |
| Mivel az érzékenység alacsony a nitrocellulóz membránokban, nem alkalmas alacsonyan kifejezett fehérjék kimutatására. | |
| Ez különösen alkalmas az alacsonyan kifejezett fehérjék kimutatására nagy érzékenysége miatt. | Háttérzaj |
| Ez alacsonyabb háttérzajjal | |
| Ez nagyobb háttérzajt ad. | A fehérjékkel való kölcsönhatások |
| A fehérjék molekulái a nitrocellulóz membránokhoz kötődnek hidrofób kölcsönhatások révén. | |
| A fehérjék hidrofób és dipól kölcsönhatások révén kötődnek a PVDF membránokhoz. | A membrán jellege |
| A nitrocellulóz törékeny és törékeny. A nitrocellulóz változatai azonban rendelkezésre állnak, és ellenállóak. | |
| A PVDF tartósabb és nagyobb kémiai ellenállással rendelkezik. | Csíkozás és újrafelhasználás képessége |
| A nitrocellulóznak nehézségei lehetnek a sztrippelés és a visszaszorítás során a jel elvesztése nélkül. | |
| A PVDF ideális alkalmazások visszavételére és szekvenálására. | Alkalmasság |
| A nitrocellulóz ideális a kis molekulatömegű fehérjék kimutatására. | |
| A PVDF alkalmasabb a nagyobb molekulatömegű fehérjék kimutatására. | Egyéb felhasználások |
| Nitrocellulóz használható nukleinsav elemzésre és pont / slot blotolásra. | |
| PVDF alkalmazható fehérjeszekvencia és szilárd fázisú vizsgálati rendszerekhez. | Költség |
| Ez olcsóbb, mint a PVDF membránok. | |
| Ez drágább, mint a nitrocellulóz membránok. | Előmelegítés szükségessége |
| Nitrocellulóz membránok nem igényelnek előzetesen metanollal | |
| A PVDF membránok metanollal való előkezelést igényelnek. | Összefoglaló - Nitrocellulóz vs PVDF |
A nitrocellulóz membránok az első olyan membránok, amelyeket kereskedelmi forgalomban használták a laterális áramlási vizsgálathoz. Nagy kapacitással rendelkeznek a fehérjék felszívására. Ezért a nitro-cellulóz membránokat nyugati blotolásban alkalmazzuk. A PVDF egy másik típusú membrán, amelyet Western blotban alkalmaznak, és nagy fehérjefelszívó képességgel is rendelkezik. Mindkét típust nyugati blotolásban használják fehérjeelemzés céljából. Azonban a PVDF membránok több speciális tulajdonsággal rendelkeznek, így jobban alkalmasak a nitro-cellulóz membránok nyugati blotolására. De a nitrocellulóz membránok jobban alkalmasak a kis molekulatömegű fehérjék kimutatására, a PVDF membránok alkalmasabbak a nagy molekulatömegű fehérjék kimutatására. Ez a különbség a nitrocellulóz és a PVDF membránok között.
Kép jóvoltából:
1. "Western blot transfer" A Bensaccount az angol Wikipédiában (CC BY 3. 0) a Commons Wikimedia alatt
Referencia:
1. Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun és Thomas A. Neubert. "Nitrocellulóz membránok alkalmazása fehérje jellemzésére mátrix által segített lézer deszorpciós / ionizációs tömegspektrometriával. " Analitikai kémia. U. S. National Library of Medicine, 2006. július 15. Web. 28 Március 2017
2. "Molekuláris markerek és növényi biotechnológia. "Google Könyvek. N. p., n. d. Web. 28 Március 2017
3. Hétfő, április 8, 2013 Tweet. "A varázslat a membránban: Válassza bölcsen a Best Western Blot eredményeket. "Biocompare. N. p., 08. Apr. 2013. Web. 28 Március 2017
