A Blunt és a Sticky End Ligation közötti különbség | Blunt vs Sticky End Ligation

Kulcskülönbség - Blunt vs Sticky End Ligation

A restrikciós endonukleázok specifikus enzimek, amelyek kettős szálú DNS-t (dsDNA) redukálnak. Molekuláris biológiában molekuláris ollók is ismertek. A restrikciós enzimek képesek felismerni a dsDNS specifikus rövid szekvenciáit, és felismerni a foszfo-diésztert és a hidrogénkötéseket a kettős szálak nyitására. Ezeknek az enzimeknek a hasítása eredményeként a DNS-fragmenseket különböző típusú végekkel, például ragadós végekkel és tompa végekkel állítják elő. A DNS-ligáz egy Molekuláris biológiában használt enzim, amely összekapcsolja a két szomszédos DNS-szálat új kötések létrehozásával. A lépést ligálásnak nevezik és a DNS végének ligált típusától függően ezeket tompa végű ligálásnak és ragadós end ligálásnak nevezhetjük. A tompa és ragacsos végső ligálás között a legfontosabb különbség az, hogy tompa végű ligálás történik a két tompa végű DNS-fragmensek között, míg a ragacsos végső ligálás 5 'és 3' túlnyúlások között fordul elő. A tompa végű ligáláshoz képest a ragadós end ligáció hatékonyabb és stabilabb.

Tartalomjegyzék

1. Áttekintés és kulcskülönbség

2. Mi a Blunt End Ligation

3. Mi a Sticky End Ligation

4. Oldalankénti összehasonlítás - Blunt vs Sticky End Ligation

5. Összefoglaló

Mi a Blunt End Ligation?

Bizonyos restrikciós endonukleázok a DNS-t az ellenkező bázissá vághatják, és tompa végű DNS-fragmenseket termelhetnek. Ezek az enzimek tompa végű vágóként ismeretesek; egyenesen lefelé a restrikciós hely közepére, anélkül, hogy elhagynák az egyszálú túlnyúló bázist. A blunt végeket nem túlfutó végeknek is nevezik, mivel nincsenek 3 'és 5' túlnyúló bázisok a végein. Mindkét szál homorú végeken ér véget az alappárokból. A közönséges, tompa véget vágó enzimek az EcoRV HaeIII, AluI és SmaI.

A blunt end ligation két tompa vég között van. Ez nem a kinyúló alapok kötődése. Ez a lekötés kevésbé hatékony, mint a ragadós végig. Azonban bizonyos esetekben a tompa végű ligálás előnyösebb, mint a ragadós end ligálás, különösen a PCR termékek ligálásakor. A PCR termékeket mindig tompa végekkel gyártják. A blunt end ligálás nem igényel komplementaritást a DNS-ben a ligáláshoz.

01. ábra: Az Eco RV enzim homogenizált végtermelése> Mi a Sticky End Ligation?

Egyes restrikciós endonukleázok képesek a dsDNS-t lecsökkenteni, így a végén egy egyszálú DNS túlnyúló darabja marad. Ezeket a végeket ragacsos vagy túlnyúló végeknek nevezik. Ragadós vég ligálás történik két olyan DNS-fragmens között, amelyek illeszkednek egymáshoz, mivel a ragadós végek párosítatlan bázissal rendelkeznek, és komplementer bázist igényelnek kötések kialakítására. Ennélfogva ugyanazt a restrikciós enzimet kell alkalmazni mindkét DNS-forrás esetében, hogy a megfelelő ligáló fragmenseket előállítsuk.

A tapadós end ligáció hatékonyabb és gyakran nagyon kívánatos a klónozási folyamatokban. Számos restrikciós enzim van, amely ragadós végeket hoz létre. Ezek az EcoRI, BamHI, HindIII stb.

02. ábra: Sticky end termelés Eco RI enzim

Mi a különbség a Blunt és a Sticky End Ligation között?

- diff Artikkel Közel a táblázat előtt ->

Blunt vs Sticky End Ligation

Blunt end ligation történik két tompa vég DNS-fragmens között.
Sticky end ligálás történik két egymáshoz illő, ragadós végű DNS-fragmens között.	Enzimek
A homorú végű vágókészülék tompa véget termel.
A tapadóvég vágók ragacsos vagy kohéziós végeket hoznak létre.	Az illeszkedő végeinek követelményei
Nem igényel megfelelő töredékeket vagy kiegészítő bázisokat.
Ehhez kiegészítő végződmények szükségesek a végein, hogy bázispárokat alkossanak.	Hatékonyság
Kevésbé hatékony, mint a ragadós végig
Hatékonyabb a tompa végig.	Összefoglaló - Blunt vs Sticky End Ligation

A restrikciós endonukleázok képesek dsDNS-t hasítani és DNS-fragmenseket létrehozni különböző célokkal. Felismerik a specifikus szekvenciákat, és korlátozzák a ragadós és tompa végeket létrehozó DNS-t. A ragacsos végek a töredékek végén vannak párosítatlan bázisok. Blunt végek egyenes hasítás miatt jönnek létre, és végeiken alappárok vannak. A tapadó end ligáláshoz két egymást kiegészítő, egyszálú DNS-darab szükséges. Blunt end ligálás történik bármely két tompa végdarab között. Ez a különbség a tompa és a ragadós kötés között.

Referenciák:

1. Roberts, Richard J. "Hogyan váltak a restrikciós enzimek a molekuláris biológia munkakörülékévé? "Az Országos Tudományos Akadémia folyományai. National Acad Sciences, n. d. Web. 2017. április 12.

2. Adnan, Amna. A restrikciós enzimek felhasználása a biotechnológiában. N. p., n. d. Web. 2017. április 12.

Kép jóvoltából:

1. "EcoRV restrikciós hely. rsh "Ramin Herati - Az Inkscape (Public Domain) által létrehozott Commons Wikimedia alatt

2. "Eco RI restrikciós enzim" Tinastella - Saját munka (Public Domain) Commons Wikimedia alatt