Különbség Nick Translation és Primer Extension között | Nick Translation vs Primer Extension

Kulcs különbség - Nick Translation vs Primer kiterjesztés

Nick fordítás és primer kiterjesztése két fontos technikát végezni Molekuláris biológia. A nick transzláció és a primer kiterjesztés között a legfontosabb különbség az, hogy a nick transzlációs folyamat más hibridizációs technikák jelölt próbákat ad, míg a primer kiterjesztési módszer egy specifikus RNS szekvenciát azonosít a keverékből, és az mRNS expressziójáról. Mindkét technika nagy jelentőséggel bír, és rutinszerűen végeznek molekuláris kutatólaboratóriumokban.

Tartalomjegyzék

1. Áttekintés és kulcskülönbség

2. Mi az a Nick Fordítás

3. Mi a Primer Extension

4. Oldalankénti összehasonlítás - Nick Translation vs Primer Extension

5. Összegzés

Mi a Nick Translation?

A Nick-fordítás fontos technika a különböző molekuláris biológiai technikák, például blotolás, in situ hibridizáció, fluoreszcens in situ hibridizáció stb. Előállítására felhasznált jelölt próbák készítéséhez. Ez in vitro DNS-címkézési módszer. DNS-próbákat használnak specifikus DNS- vagy RNS-szekvenciák azonosítására. Jelzett szondák segítségével specifikus fragmensek jelölhetők vagy vizualizálhatók nukleinsav komplex keverékéből. Ezért a jelölt próbákat különböző technikák alkalmazásával különféle technikák alkalmazásával állítjuk elő. A Nick fordítása egy olyan módszer, amely a DNáz 1 és a DNS polimeráz 1 enzimek segítségével jelzett próbákat állít elő.

A nick fordítási folyamat a DNase 1 enzimaktivitással kezdődik. A DNáz 1 bevezeti a kettős szálú DNS foszfát gerincét a nukleotidok közötti foszfodiészterkötések megkötésével. Miután a nick létrehozása megtörtént, a nukleotid 3 'OH-csoportját hozza létre, és a DNS polimeráz 1 enzim hatással lesz rá. Az 1. DNS polimeráz 5'-3 'exonukleáz aktivitása eltávolítja a nukleotidokat a nicktől a DNS-szál 3'-irányban. Ezzel párhuzamosan a DNS polimeráz 1 enzim polimeráz aktivitása és nukleotidok hozzáadása az eltávolított nukleotidok helyettesítésére. Ha a nukleotidokat felcímkézzük, akkor a helyettesítés a jelzett nukleotidok által történik, és a DNS-t azonosítja azonosításra. Ez az újonnan szintetizált, jelzett DNS alkalmazható próbákként a Molecular Biology különböző hibridizációs reakcióiban.

01. ábra: Nick fordítási folyamat

Mi a Primer Extension?

A primer kiterjesztés olyan technika, amelyet RNS-szekvenciából származó specifikus RNS-szekvencia megtalálására és az mRNS transzkriptum 5'-végének megtalálására használnak. Azt is fel lehet használni, hogy tanulmányozzák az RNS szerkezetét és a kifejezést. A primer kiterjesztési eljárást címkézett láncindítókkal vagy címkézett nukleotidokkal végezzük. Ha címkézett primereket alkalmazunk, kizárjuk a cDNS szintéziséhez használt nukleotidok jelölésének szükségességét. Ennek a technikának számos lépése van. Ez a minta RNS extrahálásával kezdődik. Ezután egy címkézett oligonukleotid primert adunk a keverékhez a szükséges alkotórészekkel együtt egy specifikus RNS-szekvencia cDNS-éjének szintéziséhez. A primer a keverék komplementer szekvenciájával felhalmozódik. A primer anneált szekvenciát templátként alkalmazva a reverz transzkriptáz enzim szintetizálja az RNS szekvencia komplementer DNS-ét (cDNS). Az alapreakció és a reverz transzkripció csak akkor következik be, ha a specifikus RNS szekvencia jelen van a mintában. Végül, gélelektroforézis denaturálásakor az RNS-szekvencia mérete meghatározható. Az mRNS (transzkripciós iniciációs hely) szekvenciájának +1 alapját könnyű megtalálni a primer kiterjesztési módszerrel is. A mintában jelen lévő mRNS mennyisége meghatározható ezzel a módszerrel, ha felesleges primert alkalmazunk.

02. ábra: Primer kiterjesztés

Mi a különbség a Nick Translation és a Primer Extension között?

- diff cikk Közel a táblázat előtt ->

Nick Translation vs Primer Extension

A Nick fordítása olyan eljárás, amely különböző hibridizációs reakciókhoz címkézett DNS-próbákat hoz létre.
A primer kiterjesztés olyan technika, amelyet speciális RNS megtalálására vagy a génexpresszió tanulmányozására használnak.	Használt enzimek
DNáz 1 és DNS polimeráz enzimeket használnak.
Reverse transzkriptáz enzimet használunk.	Fontosság
A Nick fordítás megkönnyíti a specifikus DNS-szekvencia jelölését.
A primer kiterjesztés lehetővé teszi a specifikus mRNS szekvencia mérete és a mintában jelen lévő mennyiség kimutatását.	Összegzés - Nick Translation vs Primer Extension

A Nick fordítása a DNáz 1 és a

E coli DNS polimeráz 1 enzimek aktivitásán alapuló jelölt próbák szintézisére szolgál. Ez egy in vitro módszer, amelyet a különböző hibridizációs technikák előtt a laboratóriumokban alkalmaztak. A nick-transzláció során a DNS-polimeráz 1 5'-3 'exonukleáz aktivitása eltávolítja a nukleotidokat a DNS polimeráz 1 nick és polimeráz aktivitása előtt, és az eltávolított nukleotidokat a nick mögött helyettesíti a jelölt nukleotidokkal. A primer kiterjesztés olyan módszer, amely egy adott RNS-transzkriptum felismerésére szolgál a keverékből, és számszerűsíti az érdeklődésre számot tartó RNS méretét és mennyiségét. Ez a különbség a nick fordítás és a primer kiterjesztés között. Referenciák

1. Reid, Alex. Nick Translation. "Springer. N. p., n. d. Web. 2017. április 18

2. "Primer kiterjesztés. "Nemzeti Diagnosztika. N. p., n. d. Web. 2017. április 19

3. Kuo, M. T. és W. Plunkett."Metafázis kromoszómák Nick-fordítása: nukleáz-túlérzékeny régiók kromoszómákban történő in vitro jelölése. "Az Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Tudományos Akadémiája. U.S. Orvostudományi Könyvtár, 1985. február. Web. 2017. április 19

4. Raymond et al. "Egyszerű, kvantitatív primer-kiterjesztésű PCR-vizsgálat a mikroRNS és a rövid interferáló RNS közvetlen megfigyelésére. "RNS. Copyright 2005 by RNA Society, 2005. november Web. 19 Ápr. 2017

Kép jóvoltából:

1. "Primer Extension Assay" Jjnmmnjj - Saját munkák (CC BY-SA 3. 0) a Commons Wikimedia alatt